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上海锦玟:二氧化碳培养箱在动物细胞培养中的应用
浏览次数:722发布日期:2019-06-30

    二氧化碳培养箱

    动物细胞多数需要微碱性环境,pH约为7.2~7.4,以不超出6.8~7.6范围为宜。缓冲系统对于维持培养基的pH是至关重要的,动物培养基的pH是通过模拟血浆中天然存在的

    CO2/NaHCO3(实际是CO32-/HCO3-)系统来控制的。配置动物培养基时,会将NaHCO3作为等渗溶液的一部分添加到培养基。

     一方面,由于NaHCO3不稳定,易分解产CO2,CO2从培养液中游离到空气中,会使培养液pH升高;另一方面,细胞呼吸产生的CO2以及代谢产生的酸性代谢产物,又使pH降低。

       在培养开始的一段时间,细胞较少,呼吸产生的CO2较少,前者作用大于后者,培养液中pH可能会明显上升,这就需要培养箱中补充一定量的CO2来维持pH;而后期随着细胞数目增多,细胞产生CO2增加,后者作用便大于前者,此时,培养基中pH可能会明显降低,尽管大多动物细胞耐酸能力比耐碱能力略强一些,但如果超过警戒值,则需要更换培养基进行传代。

     培养液中一般加入酚红作为pH指示剂,所以此培养基中颜色变化是:樱桃红色→粉红色→黄色。如果使用培养基之前,先通入CO2,或在CO2培养箱内进行开放式培养,则培养基颜色变化是:樱桃红色→黄色。如果培养基变黄,则需要及时更换培养基。

    培养箱中CO2浓度应与培养液中NaHCO3浓度相平衡,如果培养箱中CO2浓度设定在5%,培养液中NaHCO3的加入量应为1.97 g/L;如果CO2浓度维持在10%,则NaHCO3的加入量应为3.95 g/L。

     动物细胞对pH变化比较敏感,但植物细胞就没那么娇弱了,培养过程中pH的变化幅度只要别太大,对它并不会造成明显损伤。

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