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恒温摇床在蛋白质免疫反应中的应用
浏览次数:1432发布日期:2019-09-11

恒温摇床在蛋白质免疫反应中的应用:

① 封闭:将转膜后的PVDF膜浸没在5%脱脂奶粉封闭液中封闭,摇床 50~60转, 2 小时(室温)。

② 一抗孵育:根据抗体说明书选择适当浓度稀释抗体,将稀释好的抗体加入抗体孵育盒,并将PVDF膜放入其中,摇床50~60转,4℃孵育过夜。次日取出,TBST洗膜(3次/15 min,60转)。

③ 二抗孵育:将二抗稀释为合适的浓度,PVDF膜放入稀释的二抗工作液中,室温孵育1小时,摇床80转。孵育结束后,取出PVDF膜,TBST洗膜(3次/15 min,80转)

④ 显影:吸取适量的化学发光试剂A液和B液,等体积混合,均匀加在PVDF膜上,孵育数十秒,使用凝胶成像系统曝光并获取图像。经凝胶成像系统测量条带灰度值,计算实验蛋白的相对表达量

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